免疫沉淀(IP)
在細胞生物學研究中,有時要對細胞膜分子、胞內分子或表達產物進行定性或/和定量。但由于靶蛋白表達水乎不太高,用細胞裂解液或表達上清進行SDS-PAGE電泳、免疫印跡(Western blot)檢測很難達到實驗目的。為此可用特異性識別靶蛋白的抗體進行免疫沉淀,純化和富集靶抗原。免疫沉淀所獲得的蛋白可進行SDS-PAGE電泳,經考馬氏亮藍染色或銀染后觀察目的蛋白條帶。如果免疫沉淀得到的目的蛋白量低于考馬氏亮藍染色或銀染的檢測下限,可采用 Western blot檢測方法,提高檢測的靈敏度,達到實驗目的。
免疫沉淀是利用抗原蛋白和抗體特異性結合,以及細菌蛋白prorein A/G可特異地結合到抗體的FC片段的原理衍生出來的實驗方法。目前多用預先結合了protein A/G的sepharose。免疫沉淀的成功依賴于抗原的純度以及制備抗原的難易,主要受兩方面因素的影響:1抗原原液的豐度;2抗體對抗原的親和力。有3種類型的抗體可用于免疫沉淀:多克隆抗體,混合單克隆抗體和單克隆抗體。
服務編號:YKSO-009
服務內容:
1. 樣品處理;
2. 樣品、抗體與Protein A/G sepharose孵育;
3. 抗原、抗體與Protein A/G sepharose復合物洗滌;
4. 沉淀產物鑒定。
樣品要求:
1. 待檢測樣品:可以是直接的待檢測蛋白樣品,也可以是細胞、組織或細菌樣品,但需收取蛋白抽提費用;
2. 免疫沉淀用抗體;
3. 檢測用抗體。
交付材料:
檢測結果及實驗報告。
*不同種屬來源及不同亞類的抗體與蛋白A和蛋白G的-結合力不同(表),有的甚至不能結合,如小鼠的 IgM,這類抗體不能用蛋白 A/G-agarose直接免疫沉淀